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大鼠纖維化肝組織勻漿上清液誘導人臍帶間充質干細胞向肝細胞分化的實驗研究


  近期,解放軍醫學院研究人員發表論文,旨在探討大鼠纖維化肝組織勻漿上清液對人臍帶間充質干細胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)向肝細胞分化的誘導作用。研究指出,大鼠纖維化肝組織勻漿上清液可快速誘導HUCMSCs向肝細胞分化,形成的肝樣細胞不僅具備肝細胞表面標志物,同時有肝藥酶的表達,並具有儲存糖原、合成BUN及分泌ALB的能力,可部分替代肝細胞功能,這可能是干細胞移植改善肝功能的機制之一。該文發表在2015年第07期《中國修復重建外科雜志》上。

  取健康SD大鼠(體重180~220 g),采用腹腔注射3%硫代乙酰胺生理鹽水溶液(200 mg/kg,2次/周,共4周)方法制備大鼠肝纖維化模型,取造模成功的纖維化肝組織用於制備肝纖維化誘導培養基。取第3代HUCMSCs進行分組培養7 d,對照組以含10%FBS的DMEM/F12培養基培養,實驗組以含10%FBS及50 g/L肝纖維化誘導培養基上清的DMEM/F12培養基培養。倒置顯微鏡下觀察兩組細胞形態學變化;取培養7 d的對照組及實驗組細胞,采用Western blot法檢測甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、細胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)、CYP3A4表達情況,采用糖原過碘酸-雪夫(periodic acid-schiff,PAS)染色檢測細胞儲存糖原的能力,分別采用二乙酰肟比色法及ELISA法測定兩組細胞培養液中尿素(blood urea nitrogen,BUN)和白蛋白(albumin,ALB)的含量。

大鼠纖維化肝組織勻漿上清液誘導人臍帶間充質干細胞向肝細胞分化的實驗研究

  結果顯示, 與對照組長梭形細胞相比,實驗組細胞於誘導1 d時即可見到細胞兩極回縮,胞體變短;誘導7 d時,細胞呈不規則形或類圓形,胞體豐滿。Western blot檢測示,對照組細胞未見AFP、CK18、CYP3A4表達;實驗組細胞可表達肝細胞特異性標志物AFP、CK18及與代謝功能相關的重要蛋白CYP3A4。對照組上清液中BUN、ALB濃度分別為(0.43±0.07)mmol/L和(8.08±0.41)μg/mL,實驗組分別為(2.52±0.20)mmol/L和(41.48±4.11)μg/mL,比較差異均有統計學意義(t=24.160,P=0.000;t=19.810,P=0.000)。PAS染色示,對照組HUCMSCs細胞核呈深藍色,細胞質呈淡紫色;實驗組細胞整個胞體被染成深紫色,細胞核可見。

 

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